3 PMMoV 檢測技術的應用情況
目前，常用的植物病毒檢測方法包括指示植物法、電子顯微鏡技術、以外殼蛋白為基礎的檢測技術和以核酸為基礎的檢測技術。前2 種方法檢測周期較長，不適合田間大量樣品的檢測，目前生產中常用的檢測方法是后2 種，在以外殼蛋白為基礎的檢測技術中應用最廣泛的是酶聯(lián)免疫技術(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)，以核酸為基礎的檢測技術中應用廣泛的是反轉錄PCR(ReversetranscriptionPolymerase Chain Reaction，RT-PCR)以及核酸分子雜交技術(Nucleotide molecular hybridization)。
3. 1 ELISA 技術ELISA 是一種采用固相(主要為聚苯乙烯酶聯(lián)板)吸附，將免疫反應和酶的高效催化反應有機結合在一起的方法，其基本原理是以酶催化的顏色反應指示抗原抗體的結合。ELISA 方法簡單、靈敏度高、特異性強、安全、快速且結果容易觀察，適于大量樣品的檢測，目前已被廣泛應用于植物病毒檢測。ELISA 包括直接法、間接法、雙夾心法、競爭法、酶抗酶法、雙抗體夾心法6 種，最常用的是雙抗體夾心法和間接法。2004 年Ikegashira 等采用DAS-ELISA方法對甜椒地土壤中的PMMoV 進行了檢測。2006 年Wang 等采用DAS-ELISA 方法對采自北京、寧夏惠農、河北保定地區(qū)的165 個樣品進行了PMMoV 檢測。2007 年張永江等采用三抗體夾心酶聯(lián)免疫技術(TAS-ELISA)和RT-PCR 技術對3 份進口包被種衣劑的辣椒種子進行了檢測，建立了快速靈敏檢測體系。
3. 2 RT-PCR 技術PCR 是1985 年由Saik 等發(fā)明的一種體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，該方法是發(fā)展和普及最迅速的分子生物學技術之一。PCR 技術發(fā)明后，不斷衍生出許多新技術，RT-PCR 就是其中的一種。PMMoV 為RNA 病毒，RT-PCR 可將PMMoV 基因組RNA 中的特異性片段首先利用反轉錄酶合成cDNA，然后利用PCR 技術對基因進行擴增。PCR 技術的優(yōu)點是:①靈敏度高;②特異性強(研究表明，其產物的堿基錯配率一般只有2 × 10 － 4 );③可用于株系鑒定(同種病毒不同株系間具有免疫交叉反應，血清學方法檢測受到限制，但基因組某些區(qū)域存在很大差異，所以PCR 可用于株系鑒定);④安全可靠，無放射性危險。2004年黃粵等建立了檢測PMMoV 的RT-PCR 技術體系。
3. 3 核酸分子雜交技術該技術是用特定的已知核酸片段與互補核酸序列退火雜交，進而檢測核酸樣品中特定基因序列的方法。最初的核酸雜交試驗采用放射性同位素標記探針，近幾年來常采用生物素或地高辛標記的非放射性探針分子(更安全，壽命更長，與放射性標記的探針一樣靈敏和實用)。Wang 等利用地高辛標記的cDNA 探針、RT-PCR 以及雙抗體夾心ELISA 3 種方法對PMMoV 的檢測靈敏度進行了比較，結果表明，RT-PCR 靈敏度最高，地高辛標記的核酸斑點雜交方法靈敏度次之，雙抗體夾心ELISA 靈敏度最低。
    目前有關PMMoV 的研究十分有限，主要包括:①確定了PMMoV 的CP 是辣椒植株中L 抗性基因的激發(fā)子，并闡明CP 基因中某些核苷酸與激發(fā)辣椒中L 抗性密切相關;②PMMoV致弱株系的分離及與致弱相關基因的確定，目前已闡明126 /183 kDa 中的IR 區(qū)是主要影響PMMoV 癥狀表現(xiàn)的區(qū)域;③3′端非編碼區(qū)是PMMoV 的主要致病域。目前，北京附近地區(qū)發(fā)生的PMMoV-CN 的全基因組序列已為人們所知。進一步研究PMMoV 對防止該病毒的擴散及辣椒病毒病的有效防治具有十分重要的意義。

上一頁  [1] [2]