百合( Lilium) 集觀賞、藥用、食用價值于一身，是農業(yè)栽培中重要的經濟作物。近年來，隨著全球百合種球貿易的擴大，我國百合進口、引種數(shù)量和種植面積的不斷增加，加之不規(guī)范的種植和種球自繁，病毒病開始在各百合種植區(qū)迅速流行。據統(tǒng)計，我國百合病毒的發(fā)病率一般在40% ～ 50%，二代種球的帶毒率在90%以上，病毒病已成為加速我國百合種群衰退的重要因素之一。目前已報道的百合病毒約有20 余種，還有植原體( Phytoplasma) 一種，其中以百合無癥病毒( Lily symptomlessvirus，LSV) 、黃瓜花葉病毒( Cucumber mosaic virus，CMV) 和百合斑駁病毒( Lily mottle virus，LMoV) 等最為嚴重，其他各種病毒均為局部地區(qū)發(fā)生。百合病毒常復合侵染，主要對百合的葉片和鱗莖構成傷害，從而影響百合植株大小和產量，進而影響花枝長度、花色，降低品質。不同病毒在百合上表現(xiàn)相似癥狀，同種病毒在不同條件下的癥狀有很大變異，給病害的田間診斷和防治帶來極大困難。當前我國百合切花用種球主要來源于荷蘭進口和國內自繁，為防止百合病毒病隨種球擴散與傳播，就必須加強百合檢疫和檢測，而這有賴于建立靈敏、快速和可靠的病毒檢測方法。近年來，百合病毒檢測的研究已取得了一定的進展，主要方法有植物指示法、電子顯微技術、血清學方法及分子生物學檢測法。
1 指示植物法
    指示植物鑒定是最基本的百合病毒檢測方法。通常采用汁液接種法將百合的汁液接種到指示植物上，然后根據指示植物的感病表現(xiàn)來研究百合是否帶毒及病毒的生物屬性和種類。根據病毒的不同，用于百合病毒檢測的常見指示植物有心煙葉、番茄、昆諾藜、百日草、郁金香、千日紅等。指示植物法雖然簡單，但檢測速度很慢，癥狀表現(xiàn)的時間最短需要10 ～ 20 d，長則需要30 ～ 90 d，且靈敏度較低，受季節(jié)限制嚴重，此外，指示植物園的維護費用也較高。Masuta 和Ryu 等研究發(fā)現(xiàn)侵染百合的植物病毒寄主范圍很窄，毒原的繁殖幾乎只能在百合上進行，通過傳統(tǒng)生物學方法進行鑒定很難，病毒長期侵染百合，會發(fā)生寄主適應性變異，導致其寄主范圍變窄，很難利用指示植物發(fā)進行檢測，而有些只能由蚜蟲傳播的百合病毒不適合此種方法。因此，指示植物法應用的局限性較大。
2 電子顯微技術
    電子顯微技術( Electron microscope，EM) 的主要方法包括負染色法、超薄切片法、免疫電鏡技術和膠體金免疫電鏡等。目前，主要應用于百合病毒檢測的是免疫電鏡法。免疫電鏡( Immunoelectron microscopy，ISEM) 是應用特異性抗血清與相應病毒產生免疫反應，經負染后于電鏡下觀察病毒粒子的一種方法。具有高的靈敏性和直觀性，可以準確地確定病毒的種類�，F(xiàn)在歐洲已將ISEM作為百合種球LSV、LVX 等病毒推薦檢測方法之一，在檢__疫及百合生產中廣泛采用。免疫電鏡技術的出現(xiàn)促進了電鏡技術在百合病毒檢測上的應用，但由于電子顯微鏡的造價較高，樣品的制備繁瑣、費用昂貴，所以應用受到了一定的限制。近年來發(fā)展起來一種膠體金免疫電鏡技術，此法是先將樣品與特異免疫球蛋白反應，再用蛋白A-膠體金標記，經負染后用電鏡進行觀察，由于膠體金的附著，在電鏡下很容易檢測出病毒粒子的存在，檢測效果比免疫電鏡法更佳，可用于快速檢測和鑒定病汁液中線狀病毒、棒狀病毒以及球狀病毒，大幅度提高同抗血清對病毒的捕獲能力。膠體金制備容易，價格低廉，不僅可用于常規(guī)光鏡，而且還可用于熒光顯微鏡，應用于快速檢測技術還具有操作簡單快速，特異性、敏感性好，可單份測定，結果直觀，且可保存試驗結果等優(yōu)點。
3 血清學方法
    血清學方法以其快速、準確、適于批量檢測的優(yōu)點，已成當前國內外檢測百合病毒的常用技術。血清學是利用抗原抗體的免疫學反應檢測植物是否帶病毒。檢測百合病毒的血清測定方法主要有: 酶聯(lián)免疫( ( EnzymelinkedImmunoassay，ELISA ) 、圓點免疫結合法( Dot-ELISA，DBIA) 和組織印跡法( Tissue Blot-ELISA，TBIA) 。ELISA 是目前百合病毒檢測最常用的一種檢測方法，大部分侵染百合的病毒都可由此種方法檢出。荷蘭Asjes用ELISA 對周年循環(huán)中初侵染和再侵染植物的百合無癥病毒( LSV) 和百合斑駁病毒( LMoV) 的毒源率和病毒量進行監(jiān)測。梁巧蘭等利用ELISA 檢測侵染觀賞百合黃瓜花葉病毒的研究。劉成科等建立了百合無癥病毒單克隆抗體制備及快速檢測方法�，F(xiàn)已商品化的ELISA 試劑盒有很多，如美國Agdia 公司的南芥菜花葉病毒( ArMV) 、煙草環(huán)斑病毒( TRSV) 、郁金香碎錦病毒(TBV) 、黃瓜花葉病毒( CMV) 、百合無癥病毒( LSV) 等ELISA 試劑盒。圓點免疫結合法( DBIA) 用硝酸纖維素膜代替酶標板，使檢測更為簡便、快速和經濟。而組織印跡法( TBIA)在前者基礎上，直接把感病組織切塊固定硝酸纖維膜上，然后利用抗原抗體特異反應來檢測植物病毒。研究證實，TBIA 更靈敏，比DBIA 和ELISA 有更高的病毒檢出率。而DIAB 在百合病毒檢測上最主要的應用就是檢測病毒在百合植株中的空間分布，在百合種球規(guī)�；�病毒檢測方面具有良好的前景，目前廣泛地應用于百合病毒CMV、LSV、LMoV 的檢測與調查，檢測CMV 的靈敏度可達1． 2 g /ml，可檢測出低濃度病毒的存在。
4 分子生物學法
    分子生物學技術是通過檢測病毒核酸來證實病毒的存在的一種方法。常用的分子生物學檢測技術包括核酸分子雜交技術、雙鏈RNA 電泳技術、反轉錄PCR( RTPCR)技術。目前常用的方法是RT-PCR 技術，其突出的特點是特異性強、檢測速度快、靈敏度高，將病毒檢測靈敏度由血清學的ng 水平提高到了pg 級。可用于大量樣品的檢測，并且適應范圍廣，應用對象可以是RNA 病毒、DNA 病毒和類病毒。Hagita 等設計簡并引物，采用RT-PCR 方法從染病百合中成功檢測出百合X 病毒( LXV) 。劉毅等從進境百合中檢出了南芥菜花葉病毒( ArMV) 。于翠等從進境百合中檢出了草莓潛隱環(huán)斑病毒( SLRSV) 。韓麗娟等進行了侵染百合的李屬壞死環(huán)斑病毒病( PNRSV) 的研究。RT-PCR 技術檢測百合病毒無放射性危險，可以檢測到pg 數(shù)量級的植物病毒及同時檢測大規(guī)模的樣品。而近年來，在RT-PCR 基礎上發(fā)展起來一種多重RTPCR( muhiplex PCR) ，是在普通PCR 的基礎上加以改進，在同一個PCR 反應體系中加入多對特異性引物，針對多個DNA 模板或同一模板的不同區(qū)域擴增多個目的片段的PCR 技術。由于多重PCR 同時擴增多個目的基因，具有節(jié)省時間、降低成本、提高效率的優(yōu)點，特別是節(jié)省珍貴的實驗樣品，所以一經提出，即得到眾多研究者的青睞，并且發(fā)展迅速，在生命科學的各個領域成為一項重要的研究手段。應用此法，徐榕雪等從東方百合雜種系“索蚌”( Oriental hybrids‘Sorbonne’) 中同時檢出了黃瓜花葉病毒( CMV) 、百合斑駁病毒( LMoV) 和百合無癥病毒( LSV) 。黎昊雁等以復合RT-PCR 方法同步檢測百合X 病毒、百合無癥病毒及百合斑駁病毒。利用分子生物學技術檢測百合病毒的研究很多，隨著分子生物學技術的發(fā)展，新技術不斷推出，原有技術也在不斷改進，近年來發(fā)展的基因芯片技術將無數(shù)預先設計好的寡核苷酸、cDNA、基因組( Genomic) DNA 在芯片上做成點陣，與樣品中同源核酸分子雜交，對樣品的序列信息進行高效的解讀和分析，可大規(guī)模獲取相關生物信息，在百合病毒檢測上的發(fā)展前景廣闊。